zhangxianglin 发表于 2012-5-30 20:42:19

请教钟版主

最近有关基因组学的研究中,多采用mRNA表达测定,和DNA测定有何不同?

zhongshilong 发表于 2012-5-31 22:47:32

基因组学的研究方法学从原理上主要根据中心法则:DNA-RNA-蛋白质-代谢物-表型(疾病或疗效)。因此根据研究的目的和对象标记物,可以采用mRNA表达和DNA序列变异。mRNA主要检测表达量,而DNA主要检测突变。

binxuewang 发表于 2012-8-27 16:41:36

我们这方面太弱了,得好好学习学习下!

xyqiuwf 发表于 2012-8-27 21:51:29

请问钟老师,microRNA的基因分型是否容易做?microRNA的样本从血浆中容易提取吗?

zhongshilong 发表于 2012-8-28 23:26:23

xyqiuwf 发表于 2012-8-27 21:51 static/image/common/back.gif
请问钟老师,microRNA的基因分型是否容易做?microRNA的样本从血浆中容易提取吗? ...

microRNA基因的基因分型同其他基因的基因分型类似。
microRNA的样本从血浆中提取有一定难度,但越来越多的人掌握了这项技术。
4.2 血浆总RNA抽提与纯化
4.2.1 250μl的血浆加入10μl的Proteinase K混合均匀,在56℃消化1h;
4.2.2 加入750μl Trizol LS,混匀,震荡5min;
4.2.3 加200μl氯仿:异戊醇(24:1),再次震荡混匀5min,溶液变成粉白色,
震荡使颜色均匀;
4.2.4 12000rpm  4°C 离心15min,取新的EP管,加入到预冷500μl的异丙
醇中,再加入1μl Glycogen(RNA grade,20mg/ml),将离心分
层的上层水相加入到新EP管中,上下颠倒均匀,放-20°C静置沉淀过夜;
4.2.5取出EP管,12000rpm  4°C 离心15分钟,见到有小白点的沉淀,弃上
清,70%的乙醇洗涤,12000rpm  4°C 离心15分钟。
4.2.6用枪头小心弃去乙醇,晾干,加入40μl的Takala无RNA酶水,稍微震
匀,瞬时离心。转入低温保存。
以上步骤全部在冰上操作进行,并戴口罩和手套,所有EP管及枪头均无RNA酶。
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