zhongshilong 发表于 2012-5-9 12:49:16

血浆循环MicroRNA的研究及其进展

MiRNA在生物体的生长、发育及疾病的发生发展等过程中起着十分重要的作用。在药物代谢中,miRNAs也可以通过直接或者非直接的方式调节转运蛋白和药物代谢酶的表达,影响体内的处置过程[2。目前,人们关注的主要是miRNA在组织细胞内的功能。然而,最近的研究发现血浆中存在一些循环的miRNA。血浆循环miRNA在心衰、肿瘤、糖尿病等多种疾病中呈特异性表达,提示血清miRNA可作为潜在的生物标记物用于疾病的诊断和治疗[3-7。从研究发现循环 miRNA在肿瘤、心衰、心肌梗死、和糖尿病等疾病中的显著意义以来,人们就一直致力于循环 miRNA可否用于临床疾病的无创诊断预警方面的应用研究,随着检测技术方法的不断进步,循环miRNA在疾病诊断中的应用研究成为研究的热点。目前已经发现并被miRBase数据库[8收录的人类miRNA分子超过1500 种(http://mirbase.org/)。其中绝大部分的miRNA分子在不同病理和生理状况下进行表达,并且多数miRNA能够在人体液中检出。Chen等人[9] 应用Solexa测序技术对正常的中国人血清miRNA进行测序分析, 在男性和女性血清中分别发现了 100 种和 91 种miRNAs分子。同时为了验证 miRNA 可作为潜在的标记物,chen等人用Solexa 测序方法证明了肺癌血清中miRNA 谱与非小细胞癌明显不同。与健康人相比,肺癌患者少了28种miRNA,却出现了63种新的miRNA。同时也发现肺癌患者血细胞和血清中miRNA谱也有明显的区别,它们共有57种miRNA,但有 76 种 miRNA 仅在血清中才能检出。这一特征与健康人区别很大,健康人血细胞和血清中的miRNA是相同的。Tijsen 等[3对心衰患者的血浆miRNA 表达谱进行了研究,他们对比了12 个健康志愿者和12 个心衰患者的血浆miRNA表达谱,挑选了16 个显著差异的miRNA 进行定量PCR 验证,发现miR-423-5p、-129-5p、-675、-18b*、-1254、-622 和HS-202.1 7个miRNA 在心衰和健康对照之间存在显著性差异;其中miR-423-5p 和-18b* 能在胸闷患者中区分心衰和非心衰,而miR-423-5p 和脑钠肽存在正相关和左心室射血分数存在负相关,提示血浆iR-423-5p 是一种有潜力的心衰分子标志物。作者进一步确认心衰患者血浆中增多的miR-423-5p可能来源于衰竭的心脏,其可以促进内皮祖细胞在粥样斑块形成之初就募集在斑块周围,进行损伤修复,从而减少斑块面积,防止斑块的形成,维持斑块的稳定。我课题组采用建立的茎环荧光定量检测方法,初步对30例冠心病心肌梗死型的患者与30例性别、年龄匹配的健康志愿者的血浆hsa-miR-126和hsa-miR-16的表达差异进行比较,结果显示心梗患者血浆hsa-miR-126明显低于健康对照(P<0.001),而hsa-miR-16在两组之间的表达没有统计学差异(P=0.307)。为了明确hsa-miR-126降低对心肌细胞的作用,我们进一步在AC16细胞模型中,用hsa-miR-126抑制物沉默miR-126表达,流式细胞仪检测和TUNEL染色检测结果均显示miR-126沉默后AC16细胞凋亡明显增加,并且沉默miR-126与高糖能够协同诱导细胞凋亡。

yangyang 发表于 2012-5-11 10:43:20

钟老师,请教一个问题。合成2位甲基化的miRNA这个质量控制有保障吗? 我们原来找过好几家合成RNA的,听说2位甲基化的都不接,后来就找到invitrogin,回来的样品我们用质谱测了测,分子量与我们给的序列有出入。 我就想问问,这个2位甲基化miRNA合成具体的水平到什么程度了,会不会容易出现掉核苷酸或者漏掉甲基化的情况。谢谢!

zhongshilong 发表于 2012-5-11 22:59:36

yangyang 发表于 2012-5-11 10:43 static/image/common/back.gif
钟老师,请教一个问题。合成2位甲基化的miRNA这个质量控制有保障吗? 我们原来找过好几家合成RNA的,听说2 ...

好像广州的锐博生物能够合成各种甲基化修饰的miRNA模拟物和抑制物。效果应该还可以,你可以问问他们。

yangyang 发表于 2012-5-14 13:48:33

zhongshilong 发表于 2012-5-11 22:59 static/image/common/back.gif
好像广州的锐博生物能够合成各种甲基化修饰的miRNA模拟物和抑制物。效果应该还可以,你可以问问他们。 ...

好的,谢谢
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