zhongshilong 发表于 2012-8-29 11:40:18

血浆总RNA抽提与纯化

1 250μl的血浆加入10μl的Proteinase K混合均匀,在56℃消化1h;
2 加入750μl Trizol LS,混匀,震荡5min;
3 加200μl氯仿:异戊醇(24:1),再次震荡混匀5min,溶液变成粉白色,
震荡使颜色均匀;
4 12000rpm  4°C 离心15min,取新的EP管,加入到预冷500μl的异丙
醇中,再加入1μl Glycogen(RNA grade,20mg/ml),将离心分
层的上层水相加入到新EP管中,上下颠倒均匀,放-20°C静置沉淀过夜;
5取出EP管,12000rpm  4°C 离心15分钟,见到有小白点的沉淀,弃上
清,70%的乙醇洗涤,12000rpm  4°C 离心15分钟。
6用枪头小心弃去乙醇,晾干,加入40μl的Takala无RNA酶水,稍微震
匀,瞬时离心。转入低温保存。
以上步骤全部在冰上操作进行,并戴口罩和手套,所有EP管及枪头均无RNA酶。
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